Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小．一般在 20~40kDa，通常由（）亚基所组成。它们的作用底物为双链 DNA，极少数Ⅱ类酶也可作用于单链 DNA，或 DNA／RNA 杂合链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，Ⅱ类酶既具有（）专一性，也具有（）的专一性，一般在识别序列内切割。切割的方式有（），产生（）末端的DNA片段或（）的DNA片段。作用时需要（）作辅助因子，但不需要（）和（）。